全自動細胞計數(shù)儀在單細胞測序中的應(yīng)用

更新時間：2022-05-31

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　　單細胞基因組學(xué)技術(shù)目前正應(yīng)用得如火如荼，比如單細胞RNA測序(scRNA-seq)和染色質(zhì)轉(zhuǎn)座酶可接近性測序(ATAC-seq)。與傳統(tǒng)的大量細胞測序方法相比，單細胞基因組學(xué)技術(shù)突出了細胞之間的差異，有助于更深入地了解樣本材料。例如，scRNA-seq能夠比較健康和疾病狀態(tài)下的轉(zhuǎn)錄圖譜，而ATAC-seq能夠說明染色質(zhì)可接近性及其對基因表達的影響。

　　不過，此類研究都需要對分離的細胞核進行準(zhǔn)確計數(shù)，因為文庫制備的要求是未裂解細胞的數(shù)量低，且樣本中不含細胞團塊和碎片。此外，許多單細胞基因組學(xué)技術(shù)都需要完整的細胞核才能正常運行。

　　全自動細胞計數(shù)儀采用的方法？

　　臺盼藍染色法：

　　臺盼藍染色是常用的對死活細胞進行分別計數(shù)的方法之一，染色原理是臺盼藍不能透過活細胞完整的細胞膜，故活細胞不著色；而死亡細胞的細胞膜損傷，染料透過細胞膜在細胞內(nèi)富集而使細胞著藍色。不過，臺盼藍染色并不一定能準(zhǔn)確分辨有核細胞和細胞碎片，因此它往往低估細胞總數(shù)而高估細胞活力。

　　熒光細胞計數(shù)方法：

　　吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色原理：活細胞經(jīng)AO染色發(fā)出綠色熒光，而死細胞經(jīng)PI染色發(fā)出紅色熒光。重要的是，對背景復(fù)雜的細胞，比如說外周血單個核細胞，含有細胞碎片較多或成簇的細胞計數(shù)，避免了細胞碎片的檢測。這種方法最近也應(yīng)用在單細胞基因組學(xué)應(yīng)用上，其中綠色對應(yīng)了完整細胞，而紅色對應(yīng)了成功分離的細胞核。這種策略讓研究人員能夠計算未裂解的殘留細胞占總細胞數(shù)的百分比，同時對細胞核進行計數(shù)，提示樣本質(zhì)量，幫助研究人員確定是否繼續(xù)進行單細胞基因組學(xué)流程。

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